・８・ Ｃｈｉ月ｅｓｅ ＪｏＵｍａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ２０１ １ １７ Ｎｏ １ 流式细胞术检测血小板相关抗体和ＣＤ ６１诊断特发性血小板减少性紫癜 薛磊 ，朱薇波 ，吴竞生 ，蔡晓燕 ，刘欣 ，韩永胜 ，杨会志’，郑昌成 ，李庆 （１．安徽医科大学附属省立医院血液科，合肥，２３００００；２．安徽省立医院中心实验室） 摘要： 目的探讨流式细胞术（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ，ＦＣＭ）联合检测血小板表面ＣＤ ６１和血小板相关抗体 （ＰＡＩｇ）在特发性血小板减少性紫癜（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ，Ｉ ｒＰ）诊断和鉴别诊断中的价值。方法 用ＦＣＭ 法检测３Ｏ例健康体检者、５９例ＩＴＰ患者和２４例继发性血小板减少非Ｉ＿ｒＰ患者ＰＡＩｇ（包括ＰＭｇＡ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ）表达 率、荧光强度和ＣＤ ６１表达率，并对三组人群结果进行比较；并将ＩＴＰ患者ＰＡＩｇ、ＣＤ ６１表达水平与血小板数量进行相关 性分析。结果ＩＴＰ患者和非ＩＴＰ继发性血小板减少患者的ＰＡＩｇＡ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ表达率和荧光强度均显著高于健康对 照组（均Ｐ＜０．０１）；然而，两组患者之间比较，差异均无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。ＩＴＰ组ｃＤ ６１表达率显著低于非ＩＴＰ组 （Ｐ＜０．０５），而非ＩＴＰ组和对照组无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。ＰＡＩｇＡ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ与血小板计数均呈显著负相关，其中 以ＰＡｌｇＡ相关性最强。重度ＩＴＰ患者ＰＡＩｇ表达率明显高于轻度ＩＴＰ患者，而ｃＤ ６１表达率显著低于轻度ＩＴＰ患者，两 组差异均有显著差异（Ｐ＜０．０５）。结论同时检测血小板表面ＣＤ ６１和ＰＡＩｇ可以用于ＩＴＰ诊断、鉴别诊断和病情监 测，流式细胞术具有灵敏、快速、简便等特点，具有较好的实用价值。 关键词： 流式细胞术； 血小板相关抗体； ＣＤ ６１； 特发性血小板减少性紫癜 ［中图分类号］Ｒ ４４６［文献标志码］Ａ［文章编号］１００９—６２１３（２０１１）Ｏｌ一００８—０５ Ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ ＩＴＰ ｂｙ Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ＣＤ ６１ ａｎｄ ＰＡＩｇ ｗｉｔｈ ＦＣＭ ＸＵＮ Ｌｅｉ，ＺＨＵ Ｗｅｉ—ｂｏ，ＷＵ Ｊｉｎｇ—ｓｈｅｎｇ，ＣＡＩ Ｘｉａｏ—ｙａｎ，ＬＩＵ Ｘｉｎ， ＨＡＮ Ｙｏｎｇ—ｓｈｅｎｇ，ＹＡＮＧ Ｈｕｉ—ｚｈｊ．ＺＨＥＮＧ Ｃｈａｎｇ－ｃｈｅｎｇ，ＬＩ Ｑｉｎｇ． （Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ａｎｈｕｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ，２３００００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ＣＤ ６ １ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｌａｔｅｌｅｔ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＰＡＩｇ ｂｙ ＦＣＭ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ａｎｔｉｄｉａｓｔｏｌｅ ｏｆ ＩＴＰ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｉｔｈ ＦＣＭ，ｗｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｅｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＣＤ ６ １，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｅｅｎｔａｇｅ ａｎｄ ｅｐｉｐｏｌｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｏｆ ＰＡＩｇ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＰＡＩｇＡ，ＰＡＩｇＭ，ＰＡＩｇＧ）．Ａｌｌ ｐｅｏｐｌｅ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ：ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｏｐｌｅ ｇｒｏｕｐ（３０ ｐａｔｉｅｎｔｓ），ＩＴＰ ｇｒｏｕｐ（５９ ｐａｔｉｅｎｔｓ）ａｎｄ ｎｏｎ—ＩＴＰ ｇｒｏｕｐ（２４ ｐａｔｉｅｎｔｓ）．Ｗｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｏｐｌｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＩＴＰ ａｎｄ ｔｈｅ ｎｏｎ—ＩＴＰ，ａｎｄ ｄｉｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＡＩｇ，ＣＤ ６１ ａｎｄ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｎ ＩＴＰ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｏｐｌｅ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｃｅｎｔａｇｅ ａｎｄ ｅｐｉｐｏｌｉｃ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｐａｔｉｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ ａｒｅ ｂｏｔｈ ｈｉｇｈｅｒ（Ｐ＜０．Ｏ１），ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｉｎ ｓｔａ－ ｔｉｓｔｉｃｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＣＤ ６ １ ｉｎ ｔｈｅ ＩＴＰ ｇｒｏｕｐ ｉｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｎｏｎ－ＩＴＰ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｎｏｎ—ＩＴＰ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｅｏｐｌｅ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｉｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＰＡＩｇＡ，ＰＡＩｇＭ ａｎｄ ＰＡＩｇＧ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＰＡＩｇＡ ｉｓ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ．ＣＤ ６１ ｌｏｗｅｒ ｉｎ ＩＴＰ ｇｒｏｕｐ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｌａｔｅ－ ｌｅｔ．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＰＡＩｇ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｈｏｓｅ ＩＴＰ ａｒｅ ａｔ ｈｉｇｈ ｓｔａｇｅ，ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏｓｅ ＩＴＰ ａｒｅ ａｔ ｌｏｗ ｓｔａｇｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ．ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｅｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＣＤ ６１ ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏｓｅ ＩＴＰ ａｒｅ ａｔ ｌｏｗ ｓｔａｇｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｉｎ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｉｔ ｉｓ ｖａｌｕａｂｌｅ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ＣＤ ６１ ａｎｄ ＰＡＩｇ ｗｉｔｈ ＦＣＭ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｔｉｄｉａｓｔｏｌｅ ａｎｄ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ＩＴＰ．Ａｌｓｏ，ＦＣＭ ｉｓ ｍｏｒｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｆａｓｔ ａｎｄ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；Ｐｌａｔｅｌｅｔ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ； ＣＯ ６ １； Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕＩ１）ｕｒａ 通讯作者 血栓与止血学２０１１年第１７卷第１期 ・９・ 特发性血小板减少性紫癜（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙ— ｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ，ＩＴＰ）是最常见的一种免疫性出血性疾 抗凝），８００ ｒ／ｒａｉｎ离心１５ ｍｉｎ，分离富血小板血浆 （ＰＲＰ）。继续再２ ５００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｒａｉｎ，弃上清，加入 试剂Ａ（破坏红细胞）５ ｍｌ，将血小板吹散后，静置１０ ＩｌｌｉＩ１破坏红细胞。２ ５００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ；弃上清，加 血小板洗涤液５ ｍ１后２ ５００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｒａｉｎ。反复 洗３次后加适量的血小板稀释液，调整血小板浓度为 ２０ Ｘ１０。／Ｌ。 病，主要是由于患者产生了抗血小板自身抗体而引起 血小板破坏过多，并抑制巨核细胞产生血小板，引起 皮肤、黏膜出血。临床上对ＩＴＰ尚无特异的诊断方 法，主要靠排除其它血小板减少性疾病作出诊断，容 易造成误诊。在ＩＴＰ的发病机制中，血小板相关免疫 球蛋白（ＰＡＩｇ）起着极其重要的作用，血小板膜糖蛋白 ＧＰⅡｂ／Ⅲａ（ＣＤ ４１／６１）为一种重要的靶抗原，大多数 抗体易与血小板膜糖蛋白结合，因此ＰＡＩｇ和膜糖蛋 白的检测在此类疾病的诊断中具有较高的价值。既 往国内外多采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清中 的ＰＡＩｇ等。该方法存在许多缺陷 ，如对于严重的 血小板减少患者需采集大量血液才能达到１０。／ｍｌ血 小板数；采用溶解的血小板碎片，所测的总ＰＡＩｇ并非 代表真正血小板相关抗体等。 近年来，流式细胞仪以其能快速检测大量单个核 细胞或生物颗粒，灵敏度高，重复性好等优点在临床 诊断及研究中得到广泛应用。国外学者已开展流式 细胞术检测血小板相关抗体 ，但国内应用较少。因 此，本研究采用流式细胞术（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ， ＦＣＭ）检测ＰＡＩｇ及ＣＤ ６１两种指标，探讨上述指标在 ＩＴＰ诊断中的作用和意义。 １资料与方法 １．１对象２００９年４月～２０１０年５月本院门诊及住 院的ＩＴＰ患者５９例，其中男１６例，女４３例，年龄１６ ～８３岁，平均年龄４２．１岁；非ＩＴＰ继发性血小板减少 组２４例，其中男１３例，女１１例，年龄１７～７６岁，平均 年龄岁４６．３岁，包括急性白血病８例，再生障碍性贫 血７例，骨髓增生异常综合征３例，营养性贫血２例， 病毒感染１例，多发性骨髓瘤１例，原发性骨髓纤维 化１例，淋巴瘤１例。所有诊断均符合张之南《血液 病诊断及疗效标准》 』。健康体检者３０例，其中男１５ 例，女１５例，年龄２１～５６岁，平均年龄２８．６岁。 １．２主要试剂及仪器异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记 的羊抗人ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ单抗、藻红蛋白（ＰＥ）标记的抗 ＣＤ ６１单抗均为美国Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｌｔｅｒ公司产品；血小 板制备试剂盒，由上海太阳公司生产；流式细胞仪为 Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｌｔｅｒ ＸＬ—ＥＳＰＩＣ ＭＣＬ型 １．３检测方法 １．３．１血小板的分离取晨空腹血５ ｍｌ（ＥＤＴＡ—Ｎａ １．３．２抗体标记设测定管和阴性对照管，各加５０ １血小板，测定管中加入ｌ０ ｌ ＦＩＴＣ标记的ＰＡＩｇＡ、 ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ和ＰＥ标记的ＣＤ ６１抗体；对照管中加 入１０ １相应同型对照，室温下避光反应１５ ｍｉｎ后各 管加入５００ Ｉｘｌ ＰＢＳ重悬细胞，充分混匀后上机检测。 １．３．３流式细胞仪检测及分析检测前常规对流式 细胞仪进行光流路质量调控和荧光补偿，使仪器各项 指标在质量控制允许值范围。首先根据前向（ＦＳＣ） 和侧向（ＳＳＣ）散射光信号对血小板进行设门。每份标 本获取设门内细胞在１０ ０００个以上。检测各个指标 的阳性率表达百分率和荧光强度，数据分析使用ＥＸ ＰＯ ３２软件。 １．４统计学处理数据分析采用ＳＰＳＳ １０．０统计软 件。计量资料以均数±标准差（面±ｓ）表示，采用ｔ检 验和单因素方差分析。两变量之间的相关分析采用 Ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析。Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１为统计学 差异有显著性意义。 ２ 结 果 流式细胞术检测ＩＴＰ患者、非ＩＴＰ血小板减少患 者和健康对照组ＰＡＩｇ及ＣＤ ６１表达率、血小板数值 见表１。三组人群ＰＡＩｇ平均荧光强度值（ＭＦＩ）见表 ２。 ＩＴＰ组、非ＩＴＰ血小板减少组ＰＡＩｇＡ、ＰＡＩｇＭ、 ＰＡＩｇＧ表达率均显著高于对照组（均Ｐ＜０．０５），血小 板数量则显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）。ＩＴＰ组和非 ＩＴＰ血小板减少组ＰＡＩｇＡ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ表达水平无 明显差异（Ｐ＞０．０５）。非ＩＴＰ血小板减少组ＣＤ ６１表 达率显著高于ＩＴＰ组（Ｐ＞０．０５），而与对照组比较差 异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。 ＩｒｒＰ组、非Ｉ１ｒＰ血小板减少组ＰＡＩｇＡ、ＰＡＩｇＭ、 ＰＡＩｇＧ ＭＦＩ值均显著高于对照组（均Ｐ＜０．０５）；而 ＩＴＰ组和非ＩＴＰ血小板减少组比较ＰＡＩｇ ＭＦＩ值均无 显著性差异（Ｐ＞０．０５）。 ＰＡＩｇ表达率与血小板计数之间的相关性分析发 ・１０・ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ２０１ １ Ｙ ！Ｎｏ １ 现，ＰＡＩｇＡ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ表达水平与血小板数量均呈 负相关（ｒ＝一０．５２７、一０．３６７、一０．１９０，Ｐ＜０．０５），其 中以ＰＡＩｇＡ相关性最强。 表１ 各组人群ＰＡＩｇ、ＣＤ ６１表达率与血小板数值测定结果 注：与健康对照组比较， Ｐ＜０．０１， Ｐ＞０．０５；与ＩＴＰ患者组比较， Ｐ＜０．０１ 表２各组人群ＰＡＩｇ荧光强度数值测定结果比较 注：与健康对照组比较， 尸＜Ｏ．０５；与ｒｒＰ患者组比较， Ｐ＞Ｏ．０５ 血小板计数＞２０×１０ ／Ｌ轻度ＩＴＰ患者组与＜２０ ×１０ ／Ｌ的重度ＩＴＰ患者组ＰＡＩｇ、ＣＤ ６１阳性表达率 比较见表３，轻度ＩＴＰ患者组ＰＡＩｇ表达率显著低于重 度患者组，而ＣＤ ６１表达率则显著高于重度患者组 （均尸＜０．０５）。 表３ ２组ＩＴＰ患者ＰＡＩｇ、ＣＤ ６１表达率与血小板数值测定结果 注：与轻度ＩＴＰ患者组比较，‘Ｐ＜０．０１ ＳＳＬＯＧ Ａ ＳＳＬｏＧ Ｂ ＳＳＬｏＧ Ｃ ＳＳＬ０Ｇ Ｄ 图１健康体检者ＰＡＩｇ和ＣＤ ６１流式检测图 Ａ．血小板设门示意图。Ｂ．ＰＡＩｇＡ％：０．５２％；ＭＦＩ：０．２２１。Ｃ．ＰＡＩｇＭ％：３．２４％；ＭＦＩ：０．２５２。 Ｄ．ＰＡＩｇＧ％：２．６９％；ＭＦＩ：０．２５３。 血栓与止血学２０１１年第１７卷第１期 ＳＳＬＯＧ Ａ ＳＳＬｏＧ Ｂ ＳＳＬＯＧ Ｃ ＳＳＬｏＧ Ｄ 图２ ＩＴＰ患者ＰＡＩｇ和ＣＤ ６１流式检测图 Ａ．ＰＡＩｇＡ％：３７．６％；ＭＦＩ：０．６３８。Ｂ．ＰＡＩｇＭ％：１４．５％；ＭＦＩ：０．３８４。 Ｃ．ＰＡＩｇＧ％：５１．６％；ＭＦＩ：０．９６８。Ｄ．ＣＤ ６１：８９．５％。 毫毫． 童ＳＳＬｏＧ Ａ ＳＳＬＯＧ Ｂ 一 。 ≤ ： ＳＳＬＯＧ Ｃ ＳＳＬｏＧ Ｄ 图３非ＩＴＰ患者ＰＡＩｇ和ＣＤ ６１流式检测图 Ａ．ＰＡＩｇＡ％：３８．７％；ＭＦＩ：０．６８８。Ｂ．ＰＡＩｇＭ％：１７．Ｏ％；ＭＦＩ：Ｏ．４０５。 Ｃ．ＰＡＩｇＧ％：１３．２％；ＭＦＩ：０．３９７。Ｄ．ＣＤ ６１：９８．５％。 多数研究显示，大多数抗体与血小板膜糖蛋白结 ３讨 论 合 ，ＩＴＰ患者血浆内存在特异性自身抗血小板膜糖 蛋白抗体，如抗ＧＰ ＩＩ ｂ（ＣＤ ４１）、抗Ⅲａ（ＣＤ ６１）、抗 ＧＰＩｂ、抗ＧＰＩＸ等，尤其是血小板膜糖蛋白ＧＰⅡｂ／ｍａ 为一种重要的靶抗原，而ＧＰⅡｂ／］ｌＩａ是参与血小板聚 集的主要成分，ＧＰⅡｂ／ｍ ａ受到抗体的封闭，这不仅 使ＩＴＰ患者血小板数量减少，也使ＩＴＰ患者血小板的 黏附、聚集功能受到抑制。本研究表明三组ＣＤ ６１表 ＩＴＰ的主要发病机制是机体免疫系统失常，ＩＴＰ 患者体内ＰＡＩｇ结合至血小板，随之致敏的血小板被 单核一巨噬细胞吞噬，被吞噬的血小板主要在脾脏被 破坏，ＰＡＩｇ是ＩＴＰ实验诊断的一项敏感指标 。本研 究通过ＦＣＭ法进行检测，发现ＩＴＰ患者的ＰＡＩｇＡ、 ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ阳性率及荧光强度均有不同程度的升 达率高低顺序为：健康对照组＞非ＩＴＰ组＞ＩＴＰ组， ＩＴＰ组ＣＤ ６１表达率显著低于非ＩＴＰ组（Ｐ＜０．０５），而 非ＩＴＰ组和对照组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。 而ＩＴＰ组与非ＩＴＰ组的ＰＡＩｇ表达率、荧光强度均不存 在差异性。因此，ＣＤ ６１结合ＰＡＩｇ表达可以用于ＩＴＰ 与其他继发性血小板减少患者的鉴别诊断，同时检测 高，且表达率与血小板数量呈负相关，其中以ＰＡＩｇＡ 相关性最强。重度ＩＴＰ患者体内的ＰＡＩｇ明显高于轻 度ＩＴＰ患者，提示患者体内ＰＡＩｇ水平越高，其病情可 能越重，因此ＰＡＩｇ除了可以用于ＩｒｒＰ患者诊断，还可 以用于了解ＩＴＰ患者的疾病的严重程度，作为指导临 床治疗和监测病情的有效指标。ＩＴＰ患者的异常表达 说明ＩＴＰ患者由于自身血小板抗原变异，刺激机体产 生相应抗体的过程中，有多株的Ｂ淋巴细胞受到激 活 Ｊ，产生多种抗体，共同介导血小板被破坏，引起 ＩＴＰ’患者血小板的减少。 ＰＡＩｇ及血小板膜糖蛋白两指标，有助于提高ＩＴＰ诊断 的敏感性和特异性，与相关报道结果一致 ’ 。重度 ＩＴＰ患者的ＣＤ ６１表达率也明显低于轻度ＩＴＰ患者，提 示ＣＤ ６１表达水平也可用于病情监测。 目前检测ＰＡＩｇ的方法有酶联免疫竞争抑制试 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ２０１ １ Ｖｏｌ １７ Ｎｏ １ 验、微柱凝胶技术、单克隆抗体特异性血小板抗原固 ｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ２ｓｐｅｃｉｉｆｃ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｅｌｕａｔｅｓ ｏｆ ＩＴＰ ｐａ— ｔｉｅｎｔｅｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ＥＬ ＩＳＡ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ 定技术、流式细胞术等。研究表明ＦＣＭ的灵敏性均 高于其他检测方法，特异性稍逊于单克隆抗体特异性 血小板抗原固定技术 。然而，ＭＡＩＰＡ检测尽管特异 性高，但技术较复杂，需用正常人血小板量大，费用高 等，国内受条件限制难以普遍应用。本研究ＩＴＰ患者 ＰＡＩｇＡ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＧ的敏感性分别为９４．９％、 ｃｏｍｐｌｅｘ ＧＰＩＩ ｂ／ｍ ａ ａｎｄ ＧＰ Ｉ ｂ／ＩＸ ａｓ Ａｎｔｉｇｅｎｓ［Ｊ］．Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａ－ ｔｏｌ，１９９７，９８（２）：３２８—３３５． ［２］ ＳＣＨＭＩＴＺ Ｇ，ＲＯＴＨＥ Ｇ，ＲＵＦ Ａ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｗｏｒｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｅｌｌ ａｎａｌｙｓｉｓ：ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｐＰｒｏｔｏｃｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ ｅｈａｒａｅｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，１９９８，７９（５）：８８５—８９６． ［３］ 张之南，沈悌．血液病诊断及疗效标准［Ｍ］．第３版．北京：科学 出版社，２００７：１７２—１７６． ８８．１％、９４．９％，３种抗体同时阳性率为７８％，特异性 分别为８０％、８３％、８０％；ＣＤ ６１的敏感性为８６．２％， 特异性为９０％。与其他检测方法相比，ＦＣＭ具有以 下优点：（１）灵敏度高，即使血小板计数低于ｌ０个／ ［４］ 王毅，蔡计荣，石翠英，等．血小板相关抗体与原发性血小板减少 性紫癜关系探讨［Ｊ］．Ｉ临床检验杂志，１９９８，１６（１）：５４．５５． ［５］ＨＯＵ Ｍ，ＬＶ Ｂ，ＨＥ Ｑ，ｅｔ１．Ｂｏｔｈ ｓｐｌｅｎｉｃ ＣＤ５（＋）Ｂ ａｎｄ ＣＤ５（一）Ｂ ｃｅｉｌｓ ｐｒｏｄｕｃｅ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｇｌｙｅｏｐｒｏｔｅｉｎ—ｓｐｅｃｉｉｃｆ ａｕｔｏａｎｆｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌ，仍可分析；（２）所需标本量少，采血量少。（３）高分 辨率，可检测弱阳性和亚群表达。（４）方法快捷、准 ＩＴＰ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ．２００３，１５；ｌｌ０（１）：１—５． ［６］ ＷＡＤＥＮＶＩＫ Ｈ，ＳＴＯＣＫＥＬＢＥＲＧ Ｄ．ＨＯＵ Ｍ．Ｐｌａｔｅｌｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｓ ａｕ— ｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ［Ｊ］．Ａｅｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ，１９９８，４２４：２６—３６． 确。流式细胞术是一种适于临床的检测ＰＡＩｇ的手 段，为克服ＦＣＭ单独检测血小板抗体对ＩＴＰ诊断特异 ［７］ ＡＬＩＭＡＲＤＡＮＩ Ｇ，ＧＵＩＣＨＡＲＤ Ｊ，ＦＩＣＨＥＬＳＯＮ Ｓ．ｅｔ ａ１．Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｔｉ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｂ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｎ ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｐｌａｔｅ・－ 性较差的特点。近年来国外有少数学者开展ＦＣＭ联 合检测抗血小板抗体和血小板上特异性的ＣＤ ６１／ＣＤ ｌｅｔｓ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，２００２，８８（６）：１０３９—１０４６． ４１，但国内研究甚少。本研究表明流式细胞术联合检 测ＰＡＩｇ及血小板膜糖蛋白ＣＤ ６１，兼具灵敏、快速、简 便以及特异性高的特点，对ＩｒｒＰ的诊断及病情监测均 具有较好的实用价值。 参考文献 ［１］ＨＵＲＬＩＭＡＮＮ ＦＯＲＳＴＥＲ Ｍ，ＳＴＥＩＮＥＲ Ｂ．ＶＯＮ ＦＥＬＴＥＮ Ａ．Ｑｕａｎｔｉ． ［８］ 吴蓓倩，朱萍，牛强，等．血小板自身抗体的流式细胞检测与意义 ［Ｊ］．医学研究杂志，２００８，３７（１１）：７９—８Ｏ． ［９］郭新红，哈力达．亚森，马艳，等．血小板相关抗体对特发性血小 板减少性紫癜诊断价值的研究［Ｊ］．中华实用诊断与治疗杂志， ２００９，２３（５）：４３８—４４０． （收稿日期：２０１０—０９－１２） （上接第７页） 参考文献 ［１］ ＲＥＩＴＳＭＡ ＰＨ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：ｆｒｏｍ ｇｅｎｅ ｄｅｆｅｃｔｓ ｔｏ ｄｉｓｅａｓｅ ［７］ ７３（５）：８７６—８８９． ＰＯＯＲＴ ＳＲ，ＰＡＢＩＮＧＥＲ ＦＡＳＣＨＩＮＧ Ｉ，ＭＡＮＮＨＡＬＴＥＲ Ｃ，ｅｔ ａ１． Ｔｗｅｌｖｅ ｎｏｖｅｌ ａｎｄ ｔｗｏ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ １４ Ａｕｓｔｒｉａｎ ｆａｍｉｌｉｅｓ ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，１９９７，７８（１）：３４４．３５０． ［２］ 王剑，戴菁，傅启华，等．Ｐｒｏ２７５Ｓｅｒ纯合突变导致的Ⅱ型遗传性 蛋白Ｃ缺陷症＿Ｊ］．血栓与止血学，２００９，１５（４）：１４９—１５３． ［３］ ＯＺＬＵ Ｆ，ＫＹＯＴＡＮＩ Ｍ，ＴＡＳＫＩＮ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｅｏｎａｔｅ ｗｉｔｈ ｈｏｍｏｚｙ． ｇｏｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ａ ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ Ａｒｇｌ ７８Ｔｒｐ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ Ｃｏａｇｕｌ Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ， １９９３，４（２）：２７３—２８０． ［８］ ＤＯＩＧ ＲＧ，ＢＥＧＬＥＹ ＣＧ，ＭＣＧＲＡＴＨ ＫＭ．Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｅｘｏｎ ＩＸ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｇｅｎｅ ［Ｊ］．Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ，２００８，３０（８）：６０８—６１１． ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，１９９４，７２（２）：２０３—２０８． ［９］ ＬＩＮＤ Ｂ，ＳＣＨＷＡＲＴＺ Ｍ，ＴＨＯＲＳＥＮ Ｓ．Ｓｉｘ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｉｎｔ ｍｕｔａ— ｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｅｖｅｎ Ｄａｎｉｓｈ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｗｉｔｈ ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ［４］ ＣＯＮＡＲＤ Ｊ，ＨＯＲＥＬＬＯＵ ＭＨ，ｖａｎ ＤＲＥＤＥＮ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｌａｔｅ ｏｎｓｅｔ ａｎｄ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｕｍａｒｉｎ。ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｋｉｎ ｎｅｃｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ，１９９２，３３９（８７９５）：７４３—７４４． １５］ ＧＡＮＤＲＩＬＬＥ Ｓ，ＪＵＤＥ Ｂ，ＡＬＨＥＮＣ—ＧＥＩＡＳ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｒｓｔ ｄｅ ｎｏｖ０ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｇｅｎｅ ｏｆ ｔｗｏ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｅｆｉｃｉｅｎ－ ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，１９９５，７３（２）：１８６—１９３． ［１Ｏ］ ＬＥＤＥＲＫＲＥＭＥＲ ＧＺ．Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｌｄｉｎｇ，ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｏｌｒ ａｎｄ ＥＲ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｅｔ Ｂｉｏｌ，２００９，１９ （５）：５１５－５２３． Ｊ，ＵＳＨＩＯＤＡ Ｒ，ＮＡＧＡＴＡ Ｋ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ａｎｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔ［１１］ ＨＯＳＥＫＩｓ ｃｙ：ａ ｍｉｓｓｅｎｓｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ａ ｓｐｌｉｃｅ ｓｉｔｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，１９９４， ８４（８）：２５６６－２５７０． １６］ ＲＥＩＴＳＭＡ ＰＨ，ＢＥＲＮＡＲＤＩ Ｆ，ＤＯＩＧ ＲＧ．ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｄｅｆｉｃｉｅｎ— ｃｙ：ａ ｄａｔａｂａｓｅ ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ，１９９５ ｕｐｄａｔｅ．ｏｆ ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ， ２０１０，１４７（１）：１９－２５． Ｏｎ ｂｅｈａｌｆ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｂ— ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｐｌａｓｍａ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ ＩＳＴＨ［Ｊ］．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ，１９９５， （收稿日期：２０１０－０７—２８）